Flow CAST®: Nový standard ve funkční diagnostice alergií

Pozice BAT v diagnostickém workflow 

Flow CAST® pracuje s konceptem „Allergy in a Vial“ (alergie ve zkumavce), kdy dochází k simulaci alergické reakce ex vivo. 

1. Základní screening: Detekuje přítomnost protilátek v těle, tedy senzibilizaci. Pokud jsou hladiny sIgE u určitých alergenů extrémně vysoké, Flow CAST® se zpravidla neprovádí a výsledek se považuje za potvrzení alergie. Stanovení specifického IgE (sIgE) a kožní prick testy (SPT) zůstávají první linií (1).
    
2. Funkční mezikrok (Flow CAST®): Nastupuje v momentě, kdy jsou sIgE/SPT neprůkazné nebo negativní navzdory silné anamnéze, nebo u lékových alergenů či potravinářských aditiv, kde často neexistuje jiná varianta screeningu. Flow CAST® měří skutečnou funkční aktivaci buněk a uvolnění mediátorů (2,3).
   
   Úplný seznam BAT alergenů k nalezení zde. 
    
3. Expoziční testy: Díky zařazení BAT jako druhé linie lze u mnoha pacientů tyto invazivní metody eliminovat. V odborné literatuře (např. studie Yak et al. v oblasti pediatrického screeningu potravinových alergií) je BAT vyzdvihován jako nástroj, který významně snižuje potřebu rizikových orálních expozičních testů. Tyto testy jsou považovány za zlatý standard, jsou však rizikové, finančně nákladné a pro pacienta značně zatěžující. 

Zařazení BAT jako „mezikroku“ umožňuje lékařům funkčně potvrdit reaktivitu pacienta bez vystavení se riziku vyvolání systémové anafylaktické reakce. 

Flow CAST® vs. sIgE: Kde končí sérologie a začíná funkční test

Vztah mezi sIgE a BAT je komplementární – oba přístupy se doplňují ve prospěch pacienta. BAT efektivně řeší situace, kde sérologie naráží na své limity:

• Klinická relevance: sIgE nemusí vždy znamenat klinickou alergii. BAT potvrzuje, zda jsou protilátky IgE na povrchu bazofilů schopny po kontaktu s alergenem spustit degranulaci, což přímo koreluje s klinickou symptomatologií.
• Standardizace s ohledem na variabilita hladin IgE: Interpretace sIgE může být komplikovaná u pacientů s extréemně vysokým nebo velmi nízkým celkovým IgE. Flow CAST® využívá přímou agonizaci receptoru FcεRI, čímž minimalizuje vliv variability celkového IgE pacienta na výsledek testu.
• Lékové alergie: U mnoha léčiv testy specifického IgE nejsou komerčně dostupné nebo vykazují nízkou citlivost. Flow CAST® je v těchto případech často jedinou variantou funkčního screeningu, neboť dokáže zachytit i slabé aktivační signály typické pro lékové reakce 

Hlavní výhody systému Flow CAST®

Systém Flow CAST® se od jiných komerčních BAT testů odlišuje několika zásadními technickými inovacemi:

• Unikátní gating (CCR3): Na rozdíl od jiných metod využívá Flow CAST® marker CCR3, který je na bazofilech vyjádřen konstitutivně (stále přítomen). To činí identifikaci bazofilů v cytometru signifikantně snadnější a přesnější.
• Validovaný marker aktivace (CD63): Detekce CD63 poskytuje přímý důkaz degranulace a je v současnosti nejlépe validovaným markerem pro tento účel.
• Standardizované pufry: Pro zajištění reprodukovatelnosti obsahuje stimulační pufr přesně definované množství IL-3, vápníku a heparinu. Tato kombinace zajišťuje optimální priming buněk a snižuje variabilitu mezi měřeními.
• Logistická flexibilita a šetrnost: K provedení široké škály testů (cca 18 zkumavek) postačuje jediný odběr 1 ml plné krve do K-EDTA. Vzorky pro standardní alergeny zůstávají stabilní (při 2–8 °C) až 48 hodin, u lékových alergenů výrobce doporučuje zpracování do 24 hodin, což usnadňuje logistiku a zpracování vzorků v dávkách (batchích).
• Identifikace non-responderů: Systém dokáže objektivně identifikovat přibližně 5 % populace, jejichž buňky na IgE stimulaci nereagují, čímž eliminuje riziko falešně negativních výsledků. 

Závěr

Pro alergologa představuje Flow CAST® bezpečný a vysoce standardizovaný nástroj, který do diagnostického workflow vnáší chybějící funkční rozměr. Svou schopností objektivně potvrdit alergickou reaktivitu na buněčné úrovni, při zachování maximálního bezpečí pacienta, se stává nezbytným doplňkem moderní alergologické ambulance, zejména v oblasti komplikovaných lékových a potravinových alergií. 

1. Technická validace a standardizace (z dokumentace výrobce) 

Tyto zdroje podporují tvrzení o objektivních cut-off hodnotách, preciznosti testu a stabilitě vzorků:

• Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Defining, establishing, and verifying reference intervals in the clinical laboratory; approved guideline—third edition. CLSI document C28-A3. Wayne (PA): CLSI; 2008.
• Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Evaluation of precision of quantitative measurement procedures; approved guideline—third edition. CLSI document EP05-A3. Wayne (PA): CLSI; 2014.
• Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Interference testing in clinical chemistry; approved guideline—second edition. CLSI document EP07-A2. Wayne (PA): CLSI; 2005.
• International Organization for Standardization (ISO). ISO 15197:2013. In vitro diagnostic test systems—Requirements for blood-glucose monitoring systems for self-testing in managing diabetes mellitus. Geneva: ISO; 2013. 

2. Klinická validace a workflow (podpora odborných tvrzení)

Tyto studie podporují roli BAT jako bezpečného mezikroku a jeho výhody oproti sIgE:  

1. Santos AF, Shreffler WG. Road map for the clinical application of the basophil activation test in food allergy. Clin Exp Allergy. 2017.
2. Hoffmann HJ, Santos AF, Mayorga C, et al. The clinical relevant use of basophil activation test (BAT) in diagnosis, monitoring, and tolerance induction. Clin Exp Allergy. 2015.
3. Santos AF, Alpan O, Hoffmann HJ, et al. EAACI position paper: The basophil activation test: Food allergy and beyond. Allergy. 2021;76(1):7-21. doi:10.1111/all.14502.
4. Yak GC, et al. The diagnostic value of the basophil activation test in children with food allergy. 2016.